酶標(biāo)儀應(yīng)用雙抗體夾心法，基于不同位點的兩種單 克隆抗-人鈣衛(wèi)蛋白抗體。標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和稀釋后的待測樣本加入到具有高親和力的單克隆抗-人鈣衛(wèi)蛋白抗體包被的微孔板微孔內(nèi)。在*次孵育步驟中，樣本中鈣衛(wèi)蛋白被固相抗體捕獲。加入酶聯(lián)物后第二次孵育時，形成以下復(fù)合體：捕獲抗體-人鈣衛(wèi)蛋白-酶標(biāo)抗體結(jié)合物。接著加入TMB底物進(jìn)行顯色，加入酸液終止液終止顯色反應(yīng)，溶液變成黃色。黃色亮度與樣本中鈣衛(wèi)蛋白濃度成正比。zui后在酶標(biāo)儀450nm波長處測量吸光度。做出標(biāo)準(zhǔn)品濃度對相應(yīng)OD值的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在其上計算出樣本濃度。有些試劑盒廠家采用雙波長檢測，酶標(biāo)儀450nm（單波長測量時使用450nm，如果zui高標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度系數(shù)超過酶標(biāo)儀的范圍，應(yīng)直接于450nm（參考630nm或620nm）雙波長測量。